Agilent1100液相基本操作步骤 一、开机： 1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。 2、打开 1100 LC 各模块电源。 3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。 4、从“View”菜单中选择“MethodRun control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 5、把流动相放入溶剂瓶中。 6、打开Purge阀。 7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。 8 、设Flow：5ml/min，单击OK。 9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。 10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵， 关闭 Purge valve。 11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。 12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。 （二）数据采集方法编辑： 1、开始编辑完整方法： ● 从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。 2、方法信息： ● 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 ● 单击Ok 进入下一画面。 3、泵参数设定：（以二元泵为例） ● 在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,A=100-B ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 ● 单击Ok进入下一画面。 4、自动进样器参数设定: ● 选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”－－－－只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”－－－－可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injector program”－－-可以点击Edit 键进行进样程序编辑。 ● 点击Ok进入下一画面。 5、柱温箱参数设定: ● 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>” 键,如图所示,选中”Same as left”－－-使柱温箱的温度左右一致。 ● 点击ok进入下一画面。 6、VWD检测器参数设定: ● 在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在”Peak width Response time”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min 2s。 ● 在Timetable 中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。点击ok进入下一画面。 7、DAD检测器参数设定: ● 检测波长: 254nm,BW=30nm, 参比波长=350nm,BW=100nm; ● 检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW： 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width（Response time）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。 ● 点击Ok进入下一画面。 8、 RID检测器参数设定: ● 色谱条件: 进样体积: 20ul 。 光学单元温度: Off 。 极性: 正 。 峰宽响应时间 : 4s 。 ● 如图所示: “Optical Unit Temperature”－－-若环境温度控制在±2℃,设定为Off, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”－－-大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”－－-在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。 ● ＊＊＊＊＊ 点击RID图标，选择RID Control ：Heater 设为On，若要循环流动相，必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池，将其设为On，并输入Purge 时间。 9、 FLD检测器参数设定: 色谱条件： ● 样品：P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。 ● 进样体积：5ul。 ● 柱温箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 ● 响应时间=4s. 停止时间： 出峰完毕。 ● Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。 ● Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。 ● PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。 ● “Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。 ● Multi Ex ： 多波长及光谱（激发）。 ● Multi Em：多波长及光谱（发射）。 ● 同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。 10、 在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。 11、 单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。 12、 从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.如同时检测二个信号,则重复12,选中 Windows 2。 13、 从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。 区别: Manual－－每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。 14、 从Instrument 菜单选择System on。 15、 等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。 （DAD, VWD色谱图如下所示：） （三）、数据分析方法编辑: 1、 从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。 2、 从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。 3、 做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok,或选择”Use Ranges” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。 4、积分: 1、从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 2、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项， 则数据被积分。 3、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 4、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。 5、打印报告: 1、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。 2、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。 3、单击Ok. 4、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。 四、关机: ● 关机前，用 100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗] ● 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关）。 ● 关掉Agilent 1100电源开关。