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PCR | 条带出现拖尾或非特异性扩增如何解决?

放大字体  缩小字体 发布日期:2024-09-23  来源:Super Lab公众号
核心提示:1.非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的


1.非特异性扩增带

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:

一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。

二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。

其对策有:必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。

2.片状拖带或涂抹带

PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。

其原因往往由于

(1)酶量过多或酶的质量差

(2)dNTP浓度过高

(3)Mg2+浓度过高

(4)退火温度过低

(5)循环次数过多

其对策有:

(1)减少酶量,或调换另一来源的酶

(2)减少dNTP的浓度

(3)适当降低Mg2+浓度

(4)增加模板量

(5)减少循环次数

编辑:songjiajie2010

 
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