蛋白浓度测定的方法有很多,但每种方法都有其特点和局限性,因而需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的方法,以满足不同的要求。例如凯氏定氮法结果精确,但操作复杂,用于大批量样品的测试则不太合适;Lowry法精确度较高,但是比较费时,且每步的时间要求相对严格;Bradford法灵敏简便,但易受去垢剂的影响;BCA法以其试剂稳定,抗干扰能力强,结果稳定,灵敏度高而受欢迎。
3. Lowry法:
原理:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。通过比色法测定溶液中蛋白质的含量。
适合于测定20mg/L-400mg/L含量的蛋白质溶液,可检测的蛋白质量低达5mg,通常测定范围是20~250mg。
优点:灵敏度高,可检测低至1μg/mL的蛋白质;对于大部分蛋白质都有较好的线性关系。
缺点:
1.操作相对较复杂,需要多个步骤;
2.干扰物比较多,不仅还原剂和去垢剂会产生干扰,酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。