培养的细胞可能会污染支原体,支原体是一种常见的细菌,它可以在实验室环境中生长和繁殖。如果实验操作不当,可能会导致支原体污染细胞培养物。此外,一些细胞系可能已经被感染了支原体,一些培养用的试剂也可能带有支原体。由于支原体体积很小,可以穿过0.22um的无菌过滤膜,且通过常规显微镜观察很难发现,因此常在不知不觉中传播。为了避免支原体污染,实验室应该采取严格的操作规范和消毒措施,并且对所用的细胞和各种试剂进行检测,以确保细胞培养物的纯度和质量。以下是一些检测细胞污染支原体的方法:
一、体外培养法:培养法检测支原体污染是经典的检测方法,通过将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖,然后再转接种到支原体固体培养基中,培养一段时间后(几天至近一个月),如果固体培养中出现典型的支原体菌落,则说明待测样品有支原体污染。其优缺点如下:
A.优点:
a. 可以直接检测细胞内的支原体,具有较高的特异性和灵敏度。
b. 可以对不同类型的支原体进行鉴定和分类。
c. 可以对支原体进行药物敏感性测试。
B.缺点:
a. 体外培养需要一定的时间,通常需要3-7天才能得到结果,少数生长慢的种类可能需要长达28天时间,因此该方法不能满足紧急情况下的快速检测需求。
b. 体外培养需要较高的技术水平和操作技巧,对实验人员的要求较高。
c. 培养法对支原体的检测效率受到多种因素的影响,如细胞的状态、培养条件等,容易出现假阴性或假阳性结果。
d. 培养法不能检测支原体的DNA或RNA,不能用于分子生物学研究。