常规制种,其设备昂员,条件要求严格,技术也复杂,菌种成本高。建一个菌种厂,设备投资少则上千元,多则几万元。简易制种技术,就是不需要专门设备,利用家里现有条件就可制种。
(一)蒸汽接种法
准备:先把接种操作室打扫干净,保持潮湿清洁。准备水壶或铝锅1只,煤球炉或电炉1只,接种台1张,接种针或大镊子一把。蒸料灭菌桶:用铁皮做成比铝锅口径小一点的圆桶,桶底放铁筛架,桶内装菌袋、瓶。上边口用塑料纸或木盖封口。
操作:将煤球炉或电炉放在操作台旁,再将水壶或铝锅放在炉子上面,锅内装适量的水,接种工具先放在锅内煮沸消毒。接种时,关好门窗,洗净双手,戴上口罩。将菌种块直接通过蒸汽放入栽培种的培养料上。在蒸汽上接种,既舒服又方便,且接种质量可靠。因为蒸汽在上冒的过程中产生一股冲力,把水壶或锅上的空气排开,蒸汽不断产生,就形成锅上一片无菌区。由于菌种得到蒸汽的湿润,比在酒精灯上接的种恢复得更快,污染也少。另外蒸汽接种不使用化学药品,可避免在接种时药品对入体的毒害。
(二)代替琼脂培养基
1.绿豆粉培养基:将新鲜、干燥、不霉变的豆粉队放入锅内煮沸调团状,装入试管或三角瓶内,塞好棉塞,用 牛皮纸或报纸包扎好试管上部,成捆放于高压锅内,用12公斤/厘米2压力灭菌半小时,然后慢慢放汽,取出试管凝固成斜面即成。
2.麦粒种:将小麦粒用温水浸泡2小时,捞出放入竹筛内,4个小时烧一次清水,约24小时左右,麦粒就萌发 小芽约1厘米。这时再放火锅内煮沸半小时,取出用凉水冷却后,加入石膏、干马粪使之成散粒,然后分装试管、三角瓶、蘑菇瓶、杂酒瓶,装量按常规。塞好棉塞进行灭菌,15磅压力灭菌1小时。然后接种。 采用此法可节约大量琼脂。化学药品。
(三)于实体组织分离简易方法
在无菌环境中,直接切取菇体未形成孢子组织块,进行 培养即称简易分离技术。
方法:在第一批菇中,选取具有该品种特性的、发育正常、菌盖肥厚、朵大、无病虫害的子实体作种菇。在蒸汽上用手把子实体一分为二,用消毒过的小刀在萌盖和菌柄交界处切取一小块菌肉,移放在斜面培养基中央。分离完后标上菌种导和分离时间,然后培养。
还可将于实体菌柄与菌盖交界处的菌肉,挑一块直接放 入灭过菌的原种瓶,培养即可。这种菌种也可直接用于栽培或扩接。
(四)以菇种菇的方法
以菇种菇,就是将子实体直接当菌种栽培。方法是:把培养料按常规栽培要求拌匀后,压块,在料块表面放些子实体(子实体要干净无污染),子实体上撒一层培养料,盖上塑料纸即可。注意子实体放入后,不能重压。在20℃以下的低温培养。
(五)"U"型音提纯菌种
常规提纯银耳伴生菌——香灰菌丝,用试管培养基反复提纯,手续繁多且不易提纯,我们采用玻璃"口"型管提纯香灰菌丝,不用琼脂培养基,就可得到纯的香灰菌丝,其方法:取1—2厘米口径的玻璃"U"型管数支,装上木屑培养基,两端用塑料纸包扎严(耐高压塑料纸),灭菌后,在接种箱内,用接种针挑香灰菌丝前端白色处一点,接于"U"管一端,经培养,菌丝长至另一端后,及时挑取一点放入又一"U"型管内,这样反复进行提纯,可获得纯菌丝。
(六)几种简易母种培养基的制作
1.缺少土豆时可用米汤或小麦煮水代替
(1)米汤培养基
煮米饭时在锅中多加些水;将米汤滤在没有油污的干净容器内,取1000毫升,倒在小锅中,加热煮沸,加入琼脂20克,搅拌使之溶化,再加入葡萄糖(如无葡萄糖,加白糖亦可)20克,蛋白胨5克(没有可不加),维生素B1片(10毫克),待药物全部溶解后,趁热倒入漏斗内,分装试管,装量为试管长度的 1/4,经 15磅压力灭菌30分钟,取出;摆成斜面。平菇菌丝在米汤培养基上的生长速度比在PDA培养基上快1倍左右。
(2)小麦汁培养基
取小麦5斤;淘洗干净,置锅中,加水煮沸,煮至小麦膨胀而不裂开,中间无白心为度,过滤后取澄清液1000毫升(不足量可加清水补充),在滤液中加入琼脂20克,葡萄糖或白糖20克,制备方法同米汤培养基,过滤后的小麦粒加入0.5%碳酸粉和1.5%的石膏粉,可用于制作原种培养基,在小麦汁培养基上先后接种平菇、凤尾菇、香菇、木耳、金针菇,其长势均比在PDA培养基强。
2.缺少琼脂时可用玉米粒或米饭作培养基
(l)玉米粒培养基
将玉米颗粒用冷水泡胀,冲成绿豆粒大小碎块或将嫩玉米粒切碎,装入试管,装量为试管的 1/3~1/2,用竹筷稍压紧,然后塞上棉塞,置高压锅内,15磅压力灭菌45分钟,取出冷却后即可作为组织分离或转接菌种的培养基,将组织块或菌丝接入其中,25℃左右下培养,7~10天菌丝长满,菌丝体洁白浓密,扩接成原种,长势亦好。
(2)米饭培养基
将已滤去米汤即将入瓶的米饭分装入试管内,稍稍压紧,使米粒成形,塞上棉塞。灭菌、接种,培养同玉米粒培养基。